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Percoll細胞分離液的作用原理與優(yōu)點
更新時間:2015-10-23   點擊次數:4077次

    Percoll細胞分離液,適合分離細胞,亞細胞成分和大病毒(>70S),滲透壓均勻,粘度低,可調至生理離子強度和pH,分離條件溫和,對細胞無毒性,可以滅菌消毒。

1  作用原理  

    Percoll是一種包有乙烯吡咯烷酮的硅膠顆粒。滲透壓很低(<20mosm/kg H2O), 粘度也很小,可形成高達1.3g/ml密度,采用預先形成的密度梯度時可在低離心力(200~1000g)于數分至數十分鐘內達到滿意的細胞分離結果。由于Percoll擴散常數低,所形成的梯度十分穩(wěn)定。此外,Percoll不穿透生物膜,對細胞無毒害,因此廣泛用于分離細胞、亞細胞成分、細菌及病毒,還可將受損細胞及其碎片與完好的活細胞分離。

2 分離液的配置   

   將1份10XPBS與9份Percoll貯存液混合,制成等滲Percoll懸液,此懸液被認為是100%Percoll懸液,其密度為1.1294g/ml。用PBS或細胞培養(yǎng)液稀釋100%Percoll而獲得所需密度的Percoll分離液用于相應細胞的分離。若分離淋巴細胞應使用1.0777g/ml,配制時用稀釋液稀釋60%即可。
 

    取比重1.077的Percoll分離液X ml與離心管中,將等倍稀釋的抗凝血1/2 X ml 小心疊加在分離液上,經水平離心(1500rpm)后,便得四個細胞層,從而分離出淋巴細胞。表層為死細胞殘片和血小板,底層為粒細胞和紅細胞,中間有兩層,上層富含單核細胞,下層富含淋巴細胞。

3 分離液的優(yōu)點      

    該法是純化淋巴細胞和單核細胞的一種較好的方法,淋巴細胞純度高達98%,單核細胞純度可達78%。

    因為Percoll具有滲透性低、不穿透細胞、粘度低、密度高和無毒害等優(yōu)點,與目前常用的密度梯度離心介質,包括蔗糖(Sucrose)、血清白蛋白(Serum albumin, ALB)、聚蔗糖(Ficoll)、氯化銫(CsCl)等相比,是目前較理想的介質。Percoll密度梯度離心已被多次成功地用于動物細胞及其細胞器的分離,純化了包括人血液細胞、骨髓細胞、紅血球細胞、白血球細胞、淋巴細胞、肝細胞等在內的十余種動物細胞。這一技術也開始用于用于分離和純化植物原生質體、核、葉綠體和線粒體。

 

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